分享實驗分析檢測中關于標準曲線
發布時間：2018-06-01 11:56:14
分析檢測中的標準曲線是指一系列已知含量（濃度/量）的物質與儀器響應/信號之間的關系，數學處理就是曲線方程，圖形表示就是標準曲線。標準曲線的目的是可以根據標準曲線查出待測物質的含量。當我們得到一系列已知含量的物質的響應后，就會去建立函數關系，數學上稱曲線擬合，由于直線最為簡單，所以常常用直線方程加以擬合，當然會用到多項式擬合等其他方式。
標準曲線的核心
1.能找到確切濃度的標準物質或標準品；
2.標準系列和待測物質一定要有相同和一致的基體，因為樣品基體可能會干擾儀器的響應，從這個意義上講，樣品的前處理實際就是提供標準和樣品同樣的基體環境，盡量祛除干擾基體。所以最好的標準系列應該是樣品基體匹配的標準系列。而方法建立過程中首先要考慮的當然是基體干擾的問題，用標準加入曲線和Youden曲線分別考察樣品基體所帶來的乘積性干擾和加和性干擾。標準加入曲線就是在樣品中加入一系列標準，然后考察該標準加入曲線和標準曲線斜率的統計學差異，若有差異需考慮用標準加入法定量；而Youden曲線就是對樣品做一系列稀釋，然后用稀釋倍數如1/10、1/5、1/2、1對儀器響應做曲線，考察該Youden曲線的截距與0的差別，若有差別則提示有加和性干擾，此時測定值要減去該截距才是真實值。只有解決了標準曲線與樣品基體的匹配問題，我們的定量才可靠。
標準曲線的做法
1.標準曲線的濃度范圍應覆蓋正常操作條件下的被測量范圍；
2.標準樣品的組分盡量與被測樣品組分一致；
3.標準樣品的濃度值應等距離的分布在被測量范圍；
4.標準樣品的個數至少應有3個濃度；
5.每個標準點至少重復2次，這個重復是指從稀釋開始。
標準曲線的檢驗
標準曲線的檢驗,分為：精密度檢驗，截距檢驗和斜率檢驗，標準曲線的精密度檢驗，實際含義就是做出來的試驗點在我擬合的直線方程左右的分布情況，標準曲線是所有點以最小二乘算法（OLS）擬合出來的，這條曲線到所有點的垂直距離的和（殘差）是最小的。
因此，這條曲線并非通過所有點而是非常接近所有點，精密度檢驗就是看這些試驗點距離擬合的直線的距離有無異常，所以也稱線性檢驗（擬合檢驗）。這時的精密度（線性檢驗）需用F檢驗，P<0.05作為線性檢驗合格的標準。
標準曲線的截距檢驗和斜率檢驗分別考察Y=a+bX中a和b與0的統計學差異，a與0有差別說明有試劑空白或系統誤差，而b若與0沒差別說明儀器的靈敏度根本達不到分析要求。
決定系數是相關系數的平方，就是我們經常在儀器軟件中看到的R2或Fit，它提示的是我建立的回歸方程所解釋X對Y變化占Y變量的比值，比如決定系數是0.99也就是說我這個回歸方程可以解釋Y變化的99%，剩下的1%就是殘差。前面提到的精密度（線性檢驗）就是用這兩部分的變化做F檢驗，由于統計檢驗的臨界值比較大，通常0.90以上的相關系數都會通過這個F檢驗，當然還與實驗點數（自由度）有關。
除此之外，最后我們還要看看這些殘差的分布是否是正態的，因為，正態才符合隨機誤差的特性。
綜上所述，標準曲線的檢驗應該是線性檢驗結合失擬檢驗，以及殘差的正態性檢驗結合才是統計學上比較完備的。
